水产品中土霉素、四环素、金霉素
和多西环素的测定
四环素类抗生素（Tetracyclines, TCs）为广谱抗生素，对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌、立克次氏体等均有抑制作用。常用的四环素类抗生素有：四环素、金霉素、土霉素、强力霉素及去甲基金霉素等。四环素类药物进入兽用领域已有多年，该类药物的滥用会给食品安全带来隐患。本方法适用于水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素的测定中的前处理步骤。
Vol.01
溶液配置
（1）Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液：称取27.6 g磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）、12.9 g柠檬酸（C6H8O7·H2O）、37.2 g乙二胺四乙酸二钠盐，用水溶解并定容至1000 mL，调节pH至4.0。
（2）乙酸铅溶液：称取20 g乙酸铅，用水溶解并定容至1000 mL。
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Vol.02
提取
取2.0 g样品于50 mL离心管中，加入6 mL Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液和2 mL乙酸铅溶液，涡旋混合1 min，超声10 min，8000 rpm离心2 min；取出上清液，残渣分别用5 mL Na2EDTA- Mcllvaine缓冲液提取两次；合并三次提取液，并用Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液定容至20 mL；向离心管中加入10 mL正己烷，涡旋混合1 min，8000 rpm离心2 min，取下层清液10 mL待净化。
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Vol.03
净化
SHIMSEN Styra HLB，60 mg / 3 mL
（货号：380-00855-03）
（1）活化：依次向小柱中加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；
（2）上样：向小柱中加入待净化液，弃去流出液；
（3）淋洗：依次向小柱中加入5 mL水、5 mL 5%甲醇水淋洗，弃去流出液，于负压装置中（货号：RT-26077）将小柱抽干；
（4）洗脱：向小柱中加入5 mL乙酸乙酯-甲醇（V : V = 1 : 9）溶液，于负压装置中（货号：RT-26077）将小柱抽干，接收全部流出液；
（5）重新溶解：将流出液于45℃下氮吹近干，用初始流动相定容至1 mL，经滤器过滤（货号：380-00321），待检测。
【注意】请使用PP材质样品瓶或采用惰性化处理的玻璃样品瓶（货号：380-00511）
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— 附：参考方法 —
一、分析条件
1、色谱条件
色谱柱：Shim-pack GISS C18 [Metal free]，3 μm，100×2.1 mm（货号：227-30924-02）
流 速：0.3 mL/min
进样量：5 μL
柱 温：40 ℃
流动相：A：0.1%甲酸水溶液 B：乙腈
梯度设置如下表
2、质谱条件
质谱仪：岛津LCMS-8045
脱溶剂管温度：250℃
加热模块温度：400℃
接口温度：300℃
雾化气：氮气 3L/min
干燥气：氮气10 L/min
加热气：空气10 L/min
离子源：ESI+
扫描模式：MRM，MRM参数如下表
二、实验结果
1、草鱼中土霉素、四环素、金霉素和多西环素检测的添加回收结果
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