TaqTalk第24期 | microRNA定量数据归一化方法

您知道内源性对照品、外源性对照品和平均表达值有何意义吗？您猜对了，本期TaqTalk将为您解答有关microRNA定量数据归一化方法的问题。

microRNA或miRNA是小的非编码RNA片段，长度大约为22个碱基对，用于调节基因表达。microRNA能够通过Applied Biosystems TaqMan检测进行实时PCR定量分析。在microRNA表达实验中，起始材料的数量、样本收集、RNA制备、RNA质量和反转录效率的变化都可能导致定量误差。因此，在定量分析microRNA时必须使用合适的归一对照品。那么，让我们来了解一下“taq-nical”

qPCR microRNA分析有三种常用的归一法。您可以使用内源性对照品、外源性对照品或平均表达值归一化，也称为全局均值归一化。

目前，使用内源性对照基因的归一化是纠正RNA输入潜在差异或反转录(RT)效率偏差的最准确方法。

理想的内源性对照基因在各种组织、细胞类型和治疗方法中，具有相对一致和适度丰富的表达。表达一致的microRNA可以用作内源性对照品。已证实部分microRNA在许多不同的组织类型中以相对恒定的水平进行表达，它们可能与内源性对照品一样适用于分析。但请注意，任何单一对照品均不能作为适用于所有实验条件的通用对照品。因此，我们建议，针对每种细胞类型、组织或治疗方法，验证两个或更多microRNA作为内源性对照品。

外源性对照品或加标对照品是合成的microRNA，将其添加到样本中以监测复杂样本的提取效率或样本输入，如血浆、血清和其他生物流体。加标对照品应为一个靶序列，不存在于样本中。例如，人类中未检测到ath-miR159A，因此ath-miR159A是人类样本的良好外源性对照品。

大规模的microRNA表达谱研究可以使用全局均值归一化，使用指定样本中所有microRNA的计算均值作为归一标准值。

最后，让我们快速回顾一下这三种不同的归一法：使用外源性对照品，使用内源性对照品和平均表达值归一化。在使用qPCR分析microRNA时，您可以利用这些归一法控制实验过程的某些方面。

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