细胞治疗与基因治疗行业目前正在蓬勃发展，每个新药走上临床都需要经过IND申报，在进行IND申报则必须要对产品质量控制的检测方法进行开发和验证，不论是委托第三方检测，还是独立完成，都需要根据药典完成以下几个项目的验证：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。由于分析方法具有各自的特点，并随分析对象而变化，因此需要视具体情况拟订验证的指标。
以qPCR方法为例，上篇说到了专属性、准确度和精密度的验证，接下来看看另外几个指标的验证：
1、检测限（DetectionLimit，LOD）
检测限是指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。它是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。
对于qPCR定量方法来说，一般选择线性范围低浓度样本进行检测，以满足重复性但是不满足准确度标准的最低浓度作为检测限；
2、定量限（QuantitationLimit，LOQ）
定量限是指样品中被测物能被准确定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度要求。对于qPCR定量方法来说，一般选择线性范围低浓度样本进行检测，以能够同时满足重复性和准确度标准的最低浓度作为定量限；
3、线性（Linearity）
线性系指在设计的范围内，测定响应值或其经数学转化的形式与试样中被测物浓度直接呈比例关系的程度。
应在设计的范围内测定线性关系。可用同一对照品贮备液经精密稀释，或分别精密称取对照品，制备一系列对照品溶液的方法进行测定，至少制备5种不同浓度的供试样品。线性数据要求：至少需要五个浓度考察线性，需提供相关系数（R2）、 y截距（是检定的可能偏差）、回归斜率及方差等参数，应列出回归方程数和线性图。
上图为2020版中国药典三部3407 外源性DNA残留量测定法中，对于qPCR方法进行验证的数据要求。
使用qPCR方法进行绝对定量的检测项目，例如宿主DNA残留检测时，这一类杂质属于越少越好，在质量控制中希望线性范围更广，检测限和定量限更低，对于所使用的的定量PCR仪的线性范围和灵敏度也提出了要求。
4、范围（Range）
范围系指分析方法能达到精密度、准确度和线性要求时的高低限浓度或量的区间。范围应根据分析方法的具体应用及其线性、准确度、精密度结果和要求确定。
对于使用qPCR方法进行定性的检测项目中，比如支原体检测，对检测范围和检测限的要求需要更为严格，避免出现假阴性结果，这点对于仪器的灵敏度就提出了要求。
5、耐用性（Robustness）
耐用性又称粗放度，系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为所建立的方法用于常规检验提供依据。
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