Duchenne型肌营养不良症( Duchenne muscular dystrophy,DMI)是一种很常见的人类遗传病,为X性染色体隐性遗传性肌肉变性疾病,50%的病例由基因缺失引起,大约每3500个男婴就有一个发病,1/3的病例由新的突变所致,肌营养不良基因长200kb,至少有70个外显子,被35个平均35kb的内含子所间隔1。
目前尚无有效治疗的方法,因而高度准确的产前诊断和DMD阳性筛选是十分重要的。
以往多用 Southern分析技术来诊断,但由于该基因由多达70个外显子,至少需要7~9个cDNA克隆才能诊断,费用高、费时而难以常规开展。BMD是Becker型肌营养不良症( Becker muscular dystrophy)的缩写。BMD亦为X性染色体隐形遗传性肌肉变性疾病。
BMD的发病率为新生男婴的三万分之一。65%的BMD病例的原因是基因缺失。 Chamberlain等利用多重PCR技术对DMD进行了检测,设计了6对外显子引物。用1umol/L引物加10UTaq酶,延伸温度为?2℃3min,25个循环。
产物电泳后,如与正常对照的对应条带相比有缺失或移位,即为异常。随后该实验室又将引物增加至9对,使至少80%的DMD基因缺失得到确定,能直接诊断50%以上的病例。 Hentemann等2设计了2对产物分别为140bp和73bp的引物,对42例病人检测后,发现7例基因缺失并经 Southern杂交分析证实。Simard等报道用 Chamberlain的引物对DMD进行扩增,并对DNA模板处理进行了改进,用lm羊膜液离心后的细胞经非离子去垢剂和蛋白酶K的PCR缓冲液裂解后直接PCR扩增,效果令人满意。
由于 DMD/BMD是等位基因,近来的文献多同时检测此两种疾病。Begs等用多重PCR同时检测肌营养不良基因的8个外显子和启动子,可使98%有基因缺失的DMD/BMD获得诊断。 Covone等人用两种方法对照研究了127例DMD/BMID2一种方法是用与 DMD CDNA相关的9种cDNA探针与HindⅢ消化的基因族DNA杂交,另一种方法是用9对DMD外显子的引物进行多重PCR检测,结果73例(57%)存在基因缺失,两组方法结果相近。
我国华西医科大学的学者亦用 Chamberlain的9对引物对17例DMD/MD病例进行了检测,结果8例(47%)发现基因缺失,证明了针对西方人的引物序列同样可以检测中国病例。
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