关键词：Reeko Fotector Plus; PAHs; 土壤
背景介绍
多环芳香烃（PolycyclicAromatic Hydrocarbons，简称PAH或PAHs）又称多环性芳香化合物或多环芳香族碳氢化合物，是芳香族碳氢化合物的一种特例，由不包含杂环或取代基的芳香环所组成；其致癌、光致毒、破坏免疫系统等对人体造成巨大危害。
Fig.1 苯并（a）芘 (CAS No. 50-32-8)
首先，多环芳烃最明显的危害来至于其致癌性，多环芳烃的致癌性可能是因其易于和细胞内的DNA、RNA等遗传物质结合而起致癌作用。
其次，多环芳烃更危险在于它们暴露于太阳光中紫外线辐射时的光致毒效应。太阳光中可见光区和紫外光区的光对多环芳烃的毒性有显著影响。
最后，多环芳烃可以引起机体的免疫抑制反应，表现为血清免疫学指标的改变。
本文参考《HJ 784-2016 土壤和沉积物多环芳烃的测定高效液相色谱》，建立了利用全自动固相萃取仪（Fotector Plus）结合高效液相色谱检测沉积物中多环芳烃残留量的方法。在100mL丙酮-正己烷（1+1）提取后，使用Auto EVA-08IR浓缩至1mL后 Fotector Plus全自动固相萃取仪净化，自动完成 SPE 柱活化、样品上样、淋洗、收集等步骤，收集液再氮吹浓缩、溶剂转换、定容后，用HPLC检测。
检测方法
仪器、耗材
ReekoFotector Plus 全自动固相萃取系统 (Fotector Plus SPE)；
高效液相色谱 (HPLC) Waters Acquity UPLC；
AutoEVA-08IR全自动红外定容浓缩仪；
硅胶固相萃取柱 (CNW, 1000 mg/6mL)；
正己烷、丙酮、二氯甲烷、乙腈（TEDIA 色谱纯）；无水硫酸钠（优级纯）
样品制备
称取10g（精确至0.01 g），加入适量的无水硫酸钠，研磨成流沙状，将制备好的样品用滤纸包裹，放入索氏抽提器中，加入100mL丙酮+正己烷（1+1）以每小时不小于4次的回流速度，连续提取16~18h,抽提完毕后，将剩余的溶剂过无水硫酸钠除水，索氏抽提器用适量的丙酮+正己烷（1+1）溶剂清洗三次，合并清洗液，使用Auto EVA-08IR将样品浓缩至1mL，向固相萃取柱上方加入1cm左右的无水硫酸钠，净化完毕后使用乙腈进行转溶，供HPLC检测
固相萃取净化条件
全自动固相萃取仪 | 睿科Fotector Plus |
固相萃取柱 | 硅胶柱 (CNW, 1000 mg/6 mL) |
活化 | 二氯甲烷，正己烷 |
清洗样品瓶 | 正己烷 |
淋洗 | 二氯甲烷：正己烷（1:1） |
Fig.2 Fotector Plus 全自动固相萃取仪
Fig.3 Fotector Plus运行程序.
Fig.4 AutoEVA-08IR全自动红外定容浓缩仪
Fig.5 AutoEVA-08IR运行程序
高效液相色谱检测条件
柱子 | Waters Acquity UPLC BEH shield RP18 1.7μm×2.1×150mm |
流速 | 0.200 mL/min |
流动相 | A: 水 B: 乙腈 |
柱温 | 40°C |
进样体积 | 25 μL |
检测器 | Acquity UPLC FLR |
Tab.1洗脱梯度
Time(min) | Flow (mL/min) | %A | %B |
Initial | 0.300 | 70.0 | 30.0 |
6.00 | 0.300 | 60.0 | 40.0 |
10.00 | 0.300 | 45.0 | 55.0 |
18.00 | 0.300 | 45.0 | 55.0 |
18.50 | 0.300 | 44.0 | 56.0 |
26.00 | 0.300 | 43.0 | 57.0 |
30.50 | 0.300 | 5.0 | 95.0 |
32.50 | 0.300 | 5.0 | 95.0 |
33.50 | 0.300 | 70.0 | 30.0 |
Tab.2 FLR检测器参数
NO. | Time(min) | Ex (nm) | Em (nm) | Channel |
1 | 0.00 | 275 | 350 | A |
2 | 0.00 | 275 | 350 | A |
3 | 15.00 | 260 | 420 | B |
4 | 15.00 | 260 | 420 | B |
5 | 28.00 | 290 | 430 | A |
6 | 28.00 | 290 | 430 | A |
7 | 30.00 | 250 | 500 | B |
8 | 30.00 | 250 | 500 | B |
Fig.6 PAHs（Channal A）1-萘；2-苊；3-芴；4-菲；5-苯并（b）荧蒽；6-苯并 (k）荧蒽；7-苯并（a）芘；8-二苯并（a,h）蒽；9-苯并（ghi）苝
Fig.7 PAHs（Channal B）色谱图 10-荧蒽；11-蒽；12-芘；13-䓛；14-苯并（a）蒽；15-茚并（1,2,3-cd）芘
结果与讨论
样品经过前处理提取后，用FotectorPlus净化，使用基质加标曲线来计算整体回收率，整体平均回收率在67.34%~92.54%之间，RSD小于9.4（n=4），满足标准对回收率的要求，符合《HJ 784-2016 土壤和沉积物多环芳烃的测定高效液相色谱法》的允许差要求，回收率、RSD如表2所示
Tab.3 15种PAHs回收率以及相对标准偏差 (n=4).
化合物 | 保留时间 Min | Ex nm | Em nm | 加标水平 μg/kg | 平均回收率% | RSD |
萘 | 11.02 | 275 | 350 | 20 | 67.45 | 9.4 |
苊 | 13.70 | 275 | 350 | 20 | 64.34 | 6.9 |
芴 | 14.10 | 275 | 350 | 5 | 70.45 | 2.4 |
菲 | 15.40 | 275 | 350 | 5 | 69.01 | 7.1 |
蒽 | 19.10 | 260 | 420 | 5 | 74.2 | 9.2 |
荧蒽 | 16.45 | 260 | 420 | 5 | 77.93 | 4.3 |
芘 | 20.41 | 260 | 420 | 5 | 80.25 | 3.2 |
䓛 | 26.08 | 260 | 420 | 5 | 85.23 | 5.5 |
苯并（a）蒽 | 26.60 | 260 | 420 | 5 | 90.23 | 6.1 |
苯并（b）荧蒽 | 30.00 | 290 | 430 | 5 | 88.23 | 7.4 |
苯并 (k）荧蒽 | 30.18 | 290 | 430 | 5 | 86.21 | 1.2 |
苯并（a）芘 | 30.50 | 290 | 430 | 5 | 92.54 | 2.7 |
二苯并（a,h）蒽 | 31.28 | 290 | 430 | 5 | 90.25 | 2.3 |
苯并（ghi）苝 | 31.73 | 290 | 430 |
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