【解决方案】动物源食品中 9 种 β-受体激动剂残留量的分析方法

艾杰尔飞诺美

2019.7.09

艾杰尔-飞诺美（Agela & Phenomenex）

本文使用 Cleanert^® PCX 固相萃取柱，按照中华人民共和国国家标准农业部 1025 号公告-18-2008 公告《动物源食品中 9 种 β-受体激动剂残留检测方法－超高效液相色谱-串联质谱法》提供的方法，检测猪肉、猪肝、牛肉、羊肉等四种组织中的 9 种 β-受体激动剂残留。

实验

部分

实验方法

测定的 9 种 β-受体激动剂信息

特布他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克仑特罗、妥布特罗和喷布特罗等 9 种 β-受体激动剂信息如下表所示。

实验

部分

样品酶解

分别称取猪肉、猪肝、牛肉和羊肉样品各 2 g（精

确到 0.01 g），置于 50 mL 棕色离心管中，加入 0.2 mol/L 乙酸铵缓冲液（pH 5.2）8.0 mL；再加入 β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶 40 μL ，涡旋混匀，于 37℃下避光水浴振荡约 16 h。

样品提取

酶解后放置至室温，涡旋混匀，10000 rpm 离心 10 min；转移上清液于另一 50 mL 离心管内，加入 0.1 mol/L 高氯酸溶液 5 mL，涡旋混匀，用高氯酸调 pH 至 1.0±0.2，10000 rpm 离心 10 min；将上清液转移至另一 50 mL 离心管内；用 10 mol/L NaOH 溶液调 pH 至 9.5±0.2；加入乙酸乙酯 15 mL，涡旋混匀，并振荡 10 min，5000 rpm 离心 5 min，取出上层有机相至另一 50 mL 离心管内；再在下层水相中加入叔丁基甲醚 10 mL，涡旋混匀，并振荡 10 min，5000 rpm 离心 5 min；合并有机相， 50℃下氮气吹干，用 2%甲酸水溶液 5 mL 溶解，备用。

净化处理

PCX 小柱依次用甲醇、水、2%甲酸溶液各 3 mL

活化；取全部备用液过柱再依次用 2%甲酸水溶液、甲醇各 3 mL 淋洗，减压抽干；用 3%氨水甲醇溶液 2.5 mL 洗脱；洗脱液在 50℃下用氮气吹干，残余物用甲醇-0.1%甲酸溶液（10＋90，V/V）0.2 mL 溶解，涡旋混匀，15000 rpm 离心 10 min，取上清液适量，供超高效液相色谱-串联质谱仪测定。

液相色谱条件

色谱柱：

Bonshell C18，50 mm × 2.1 mm，1.7 µm；

流动相：A:甲醇；B:0.1%甲酸的水溶液。梯度洗脱步骤如下表所示。

质谱条件

离子源参考参数

质量分析器参考参数

光电倍增器电压：650V

定性、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量见下表

实验

部分

实验谱图

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实验

部分

结果与讨论

检测数据的质量控制

基质线性考察

分别精密量取9种β-受体激动剂混合标准工作液适量，添加到2 g空白试料中，制得浓度为0.25、0.5、1、2、5 µg/kg的各系列空白添加试料，按9.2～9.4步骤操作，从低浓度到高浓度测定，每一浓度进样3针，按其所得峰面积与相应的添加浓度作标准曲线，并依次计算回归方程及相关系数。

定量方法

采用空白添加单点校准或标准曲线校准，按峰面积比计算，即得。采用空白添加标准曲线校准时试样溶液及对照溶液中9种β-受体激动剂的峰面积均应在仪器检测的线性范围之内。

实验结论

本实验选用 Cleanert PCX 固相萃取柱（60 mg/3 mL)，按照农业部 1025 号公告-18-2008 公告《动物源食品中 9 种 β-受体激动剂残留检测方法－超高效液相色谱-串联质谱法》提供的方法，验证测定猪肉、猪肝、牛肉、羊肉等四种组织中的 9 种 β-受体激动剂残留回收率。通过不同基质的样品添加回收率实验，结果显示 Cleanert PCX 固相萃取柱性能良好，完全能够符合兽药残留检测的要求并应用在动物产品的残留监控工作中。