在日常检测或方法转移过程中，新色谱柱无法重现旧柱的方法，或者不同时间测试结果不重现，是困扰分析人员的常见问题之一，具体是什么原因导致的呢？可以从哪些方面进行排查？本文将结合两个实际案例为大家说明。
实例分享一
客户开发的分析方法，转移到新site后发现新购买的同一批次3根CORTECS C18新柱都无法重现原方法，但仅第一个化合物峰形较差，其他峰均无问题，这可能是什么原因？见图一。
图一
色谱柱返回沃特世实验室后，首先复核色谱柱柱效，3条色谱柱性能均正常，判断化合物峰形不佳不是色谱柱的质量问题。然后按照客户提供的方法重现样品分析条件，发现与客户反馈的结果一致，峰1拖尾严重。后期我们在原分析方法的基础上进行了调整，如增加甲酸浓度，使用50 mM甲酸铵（pH不变）等，发现使用缓冲盐后，峰形明显改善，但出峰顺序改变。见图二。
图二
优化后的方法（使用50 mM甲酸铵）在不同色谱柱上的重现结果，见图三。
图三
实例分享二
同一支色谱柱同一个样品，在pH耐受性试验中发现个别杂质峰保留时间不稳定，随pH变化而改变，如图四所示，说明该杂质对pH敏感，为何会出现这种现象？我们应该如何应对？
图四
我们知道酸/碱性化合物的保留行为受pH影响很大，酸性化合物在低pH的条件下呈分子状态，保留较好；而碱性化合物在高pH的条件下呈分子状态，保留较好。而当流动相pH趋于化合物pKa（即非保留平台区）时，pH变化会严重影响化合物的保留行为，如图五所示。
图五
在方法开发初期尽量将流动相pH设置在分析物pKa±2以外区域，若无法避开，pH的精准控制将非常重要，建议尽量采用称重法配制流动相，以保证不同时期配制流动相测试的可重现性。
综上，当分析方法中使用添加剂或者缓冲盐的浓度较低时，可能容易出现新柱结果不重现的问题，您可以考虑以下Tips~
Tips
✔ 增加添加剂或者缓冲盐浓度，或者使用高浓度缓冲盐老化新色谱柱后再使用。
✔ 对pH敏感项目如肽药，需要对pH精准控制，流动相配制可采用称重法。
✔ 方法开发初期尽量多考察不同批次色谱柱，以验证方法的耐用性。
往期回顾
► 色谱柱的使用（八）如何排查伴随压力升高的柱寿命问题？
► 色谱柱的使用（七）新色谱柱为何柱效低？
► 色谱柱的使用（六）论色谱柱与仪器的匹配性
► 色谱柱的使用（五）解读C18的技术参数（下）
► 色谱柱的使用（四）解读C18的技术参数（中）
► 色谱柱的使用（三）解读C18的技术参数（上）
► 色谱柱的使用（二）极性农药分析专用柱Torus DEA 的使用技巧
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