摘要
本实验参考2020版中国药典，使用Kinetex EVO C18色谱柱，以0.03mol/L磷酸二氢钾溶液 (用0. 2mol/L氢氧化钠溶液或磷酸调节pH值至4.5)-乙腈(84 : 16)为流动相对甲钴胺供试品溶液进行测试，实验结果显示，供试品溶液中甲钴胺与相邻杂质分离度为3.33，可实现有效分离。
关键词：高效液相色谱法；甲钴胺；Kinetex EVO C18色谱柱；
样品信息
表1. 甲钴胺相关信息
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备：
高效液相色谱仪，紫外检测器；
试剂材料：
实验用水为屈臣氏蒸馏水，磷酸二氢钾为分析纯试剂，磷酸为色谱纯试剂；
系统适用性溶液：取甲钴胺对照品约5mg，加1mol/L盐酸溶液5.0mL，避光放置1小时，立即加入1mol/L氢氧化钠溶液5.0mL，摇匀。自然光下放置5-10分钟；
供试品溶液：取本品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.5mg的溶液。
对照溶液：供试品溶液用流动相稀释100倍
灵敏度溶液：供试品溶液稀释2000倍
色谱条件
色谱柱：Kinetex EVO C18，5 µm，4.6 × 250 mm；
流动相：0.03mol/L磷酸二氢钾溶液 (用0. 2mol/L氢氧化钠溶液或磷酸调节pH值至4.5)-乙腈(84 : 16)；
流 速：1.1 mL/min；
柱 温：35℃；
进样量：20 µL；
波 长：342 nm；
实验结果
表2 系统适用性溶液分析结果
图1. 系统适用性溶液高效液相色谱图
图2. 供试品溶液高效液相色谱图（纵坐标局部放大）
实验结论
使用Kinetex EVO C18色谱柱，以0.03mol/L磷酸二氢钾溶液 (用0. 2mol/L氢氧化钠溶液或磷酸调节pH值至4.5)-乙腈(84 : 16)为流动相对甲钴胺系统适用性溶液进行测试，结果表明，供试品溶液中甲钴胺峰与相邻杂质峰分离度为3.33，可实现有效分离。
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