【技术干货】掌握RNA提取六大要素，助你打破新手魔咒

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用于提取RNA的样本应尽量采用新鲜样本，并尽快在低温冻存或保存液中保存，以抑制RNase的活性。动物组织和血液可在4℃或常温条件下分别保存于RNAStore Reagent和RNALock Reagent中。提取后的RNA应采用RNase-free H₂O溶解后分装冻存，长期保存建议冻存于-80℃。

彻底破碎细胞结构，能使细胞充分释放RNA，并使裂解液充分浸润，抑制核酸酶活性。样本数量较少时可采用传统的液氮研磨进行均质，当样本数量较多时，可采用TGrinder H24R 组织研磨低温均质仪一次可对24个样本进行低温均质处理。

RNase活性的抑制效果决定了RNA提取的完整性。裂解液中的变性剂，能够使蛋白变性、抑制RNase的活性。为了达到更好的RNase抑制效果，往往会在裂解液中额外加入β-巯基乙醇。β-巯基乙醇具有较强的挥发性，为更安全的提取RNA，可采用RNA Easy Fast快速总RNA提取试剂盒。该试剂盒采用与蛋白酶K相结合的形式，有效裂解细胞、抑制RNase活性。

当样本量过大时，裂解液无法充分裂解细胞、抑制RNase活性， RNA的提取效率及完整性下降，同时还会使溶液pH偏碱性，影响RNA的稳定性并造成基因组的残留。

当提取样本量过小或本身RNA丰度偏低时，如血浆等无细胞或少细胞体液样本，需使用专用的微量RNA提取试剂盒，RNAprep Pure微量样本总RNA提取试剂盒配备Carrier RNA，能够捕获微量核酸，提高RNA的提取效率。

RNA的纯化可分为有机抽提、硅基质柱和磁珠纯化等方式。硅基质柱法由于操作简便、快速以及所获得的RNA纯度高等特点，被广泛应用。此方法纯化应用灵活，能够与DNase I相结合，在提取RNA的过程中去除基因组DNA，如RNAprep Pure总RNA提取试剂盒（适合样本：细菌，动物组织，植物组织，血液，石蜡包埋组织）能够在1小时内完成总RNA的提取和基因组DNA的去除。

多糖多酚植物样本是RNA提取中的难点。多糖理化性质与RNA相似，易形成共沉淀；多酚易氧化形成醌类，与RNA形成不可逆的结合，降低后续酶促反应的效率。RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒能够有效的沉淀多糖、螯合多酚、抑制氧化酶活性，从而提高RNA的提取效率和纯度。