值得收藏！5个药物分析方法验证的小技巧

开发分析方法时，尽量避免使用难以转移、复制和设置的参数，追求极致的检测限（LOD）或定量限（LOQ）可能是有利的，但将方法转移是从一个实验室到另一个实验室，由于不同品牌仪器间的差异会导致不必要的麻烦；尤其对于分离度，需要根据样品实际情况合理设置。

在理想世界中，每个批次的试剂都是一样的，但实际并非如此，很多因素都会影响试剂的质量，特别是生物试剂，批次间的差异很大。因此，在进行方法验证时，建议测试多批次试剂以保证方法的规范和标准。使用新批次的试剂之前建议进行测试，看是否符合标准。尤其对于实验室共同使用的试剂，可能无法追踪试剂使用情况，如果被污染，将会影响分析方法的验证。

对于色谱柱来说，色谱柱填料和色谱柱也都是有不同批次，进行方法验证时需要考虑填料和色谱柱批次间的重现性，测试不同批次填料和色谱柱对方法的适用性。

在方法描述里，避免使用“或等效/效能相当”等语句，如：C18或等效色谱柱，LC-MS级别溶剂或等效；虽然类似说法可使方法验证更快，但实际上，每个人对等效的理解不同，采用所谓”等效”的产品做替换，实验可能会因此出现问题。在做方法验证时，准备充足的色谱柱、溶剂等实验耗材是非常必要的。

分析方法中使用或规定使用的色谱柱，进行验证时不能使用“或等效”的产品替代，这一点非常重要，否则可能会产生不同于方法要求的结果。

正如前面所说，建议在进行方法验证时使用新鲜试剂和新的色谱柱。例如，在质谱分析中，流动相中经常加挥发性有机酸/碱改性剂改善电离，水相流动相不能放置太久，随着时间推移，添加改性剂的浓度也会发生变化，会导致电离效率变低，从而影响检测灵敏度，因此，配制大量的流动相，不但不会节省时间和成本，相反，出现问题时还需要使用新鲜配制的流动相和新色谱柱重复测试。

对于色谱柱的使用，如果在流动相中添加了诸如三氟乙酸或其他离子对试剂，有些实验人员认为是可以冲洗掉的，但这一类添加剂在色谱柱里是有残留的，使固定相改性，从而改变色谱柱的保留，使用这一类色谱柱开发的方法在新柱子上是无法重现的。因此，实验人员要记录色谱柱的使用情况，避免在方法验证中使用此类的色谱柱。

作为实验人员，我们每天处理实验，需要关注实验细节，而实验细节是需要描述清晰的SOP支持。实验室之间、实验员之间在实验的操作以及对SOP中专用术语的理解上会存在很大的差异，如果SOP中描述不清晰，比如流动相配制是按体积比还是重量比，调节pH值是定容前还是定容后，计算S/N（信噪比）用哪种计算方式，每个人都按照自己的理解或操作习惯进行实验，结果会有很大的差异。

因此在编写SOP时，尽量参照或遵循ACS指南、其他国际指南或药典要求，使用行业内众所周知的术语尤为重要。当您将方法转移到另一个实验室时，也会变得容易很多。