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史俊霞
疫苗检测：
人生就像一段旅程，这段路程有时精彩， 有时荆棘，我们在精彩中绽放自我，在荆棘中奋勇前进。而在这段旅程中，保驾护航的疫苗不仅在传染病领域提供了预防功能，新型疫苗在一些医学疑难杂症的预防和治疗领域有了新的突破。疫苗因其组成复杂，结构庞大，工艺繁琐，使得其检测和分析更有挑战。今天我们从疫苗中主成分检测，工艺监控和载体检测三个角度分享一下疫苗检测中的创新应用。
HPLC方法检测疫苗中的主成分
蛋白质疫苗在预防肝炎，带状疱疹病毒，HPV感染，新冠病毒和其他病毒感染起到了非常重要的应用，除了经典的酶联免疫的方法。液相色谱法因检测方法简单，重复性好，越来越多应用于蛋白总量的测定。核酸疫苗的研发和生产中，HPLC技术的应用也解决了一些检测难题。
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SEC方法检测目标蛋白总量
-BIOBASIC SEC 120
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BIOASIC SEC-120色谱柱检测分子量比较小的用于猪的疫苗蛋白总含量测定，重复性良好。优于酶联免疫法偏差较大的结果。
SEC方法检测人免疫球蛋白二聚体
-MAbPac SEC-1
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SEC方法是检测蛋白类制剂中的聚体分析的经典方法。5 μm的300Å孔径的MAbPac SEC-1色谱柱可以快速分析人血白蛋白的聚体和单体。
疫苗分子量，结构和组成不同，我们有不同排阻范围的柱子选择，下面是我们可以用于疫苗检测的一些SEC柱子信息，可以用于快速蛋白纯度测定和含量测定。
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RP方法检测蛋白组成-MAbPac RP
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蛋白类疫苗需要检测目标蛋白的含量，对于抗体类蛋白，可以采用亲和色谱法快速定量，重组蛋白常用电泳法，免疫化学法等方法，很少使用反相色谱法进行。因为疫苗成分比较复杂，常规的硅胶基质反相色谱柱，孔径比较小，不耐碱洗等因素。新型的耐碱性聚合物基质的MAbPac RP色谱柱，可以在检测该重组疫苗蛋白，在0.1 mg/mL-2.5 mg/mL范围内线性良好。用于蛋白疫苗定量检测。
SEC方法检测mRNA聚体
-BIOBASIC SEC 1000
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尺寸排阻色谱法（SEC）是用于聚体分析的经典方法，硅胶基质的BIOBSIC SEC 1000可以将该2000 nt的聚体与单体分开。
RP方法检测mRNA杂质-DNAPac RP
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反相色谱法是在变性条件下分析mRNA的杂质，DNAPac RP 1500Å的孔径，可以用于不同碱基对大小的mRNA的分离。
IEC方法检测mRNA杂质-DNAPac PA200
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离子交换色谱法在非变性条件下分析mRNA杂质，可以用于监控mRNA工艺中杂质的去除情况。也可以用于成品中mRNA完整性的检测。
HPLC方法检测疫苗生产中的工艺组分
疫苗生产过程中会引入各类潜在风险物质，在生产过程中会引进一些灭活剂，裂解剂，冻干保护剂等制剂，为了增加免疫持久性，调节亲和力会加入一些佐剂，赋型剂，防腐剂等组分。特色液相色谱柱在CAD检测器下可以快速进行这类组分的检测。
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RP方法检测戊二醛-Acclaim 120 C18
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戊二醛具有甲醇含量低，无致畸变，无积毒的特点，越来越被广泛用于灭活。DNPH衍生后的戊二醛可以产生两个衍生产物，两个产物都可以在Acclaim 120 C18柱上得到很好的分离，在戊二醛在0.4 μg/mL-10.0 μg/mL范围内线性良好。
阴离子交换反相方法检测去氧胆酸
-Acclaim Surfactant
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去氧胆酸是一种裂解剂，可以裂解病毒颗粒后经过纯化去除部分病毒成分，有效降低不良反应。Acclaim Surfactant Plus色谱柱采用阴离子交换和RP双重保留机理，可以在CAD检测器下分离和定量不同的去氧胆酸。
阴离子交换反相色谱法快速检测吐温80
-Retain AX
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吐温80也可以用于裂解病毒颗粒，分光光度法因其萃取时间较长，导致分析时间比较长，使用Hypersep Retain AX色谱柱可以避免复杂的样品前处理，直接定量生物制剂中的吐温80含量。
阴离子交换，RP色谱法分析PEG组成
-Accliam Surfactant Plus
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对聚乙二醇（PEG）评估时，希望在色谱上对其进行尽可能的分离，以获得指纹谱图，进行更好的质量控制。Acclaim™ Surfactant Plus是一款表面活性剂专用柱，尤其适合分析聚合物类的辅料，在对不同聚合度的PEG分析 时，都能够获得优秀的峰型和分离度。
HILIC分析蔗糖-Hypersil APS-2
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蔗糖，乳糖添加在活性物质浓度较低的疫苗中，减少冷冻干燥时被升华的气流带走并且使冻干后的产品能形成较理想的团块。Hypersil APS-2在分析蔗糖，乳糖时，峰对称度好，定量准确。
RP分析胆固醇、DPPC、Lyso-PC和皂苷分析-Hypersil Gold PFP
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HPLC方法检测疫苗载体
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RP分析纳米脂质体组成-Acclaim 300 C18
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RP分析纳米脂质体组成-Accucore C30
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纳米脂质体是一种非常有前景的药物载体，可以有效保护mRNA等药物运输到细胞中，脂质体的组成和比例会影响药物的包裹率和稳定性，300Å的Acclaim C18色谱柱和80Å的Accucore C30色谱柱可以将纳米脂质体中的几种组分分开。
IEC分析AAV包裹率-ProPac3R SAX
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AAV用于药物载体中，其包裹率通常通过超速离心的方法测定，但是检测时间比较长，仪器成本也比较高。新型的，单分散的3um的强阴离子交换柱ProPac 3R SAX可以将不同亚型的包裹的AAV与空壳的AAV分开，并且可以得到杂质峰。
疫苗接种是预防控制传染病最有效的手段，新冠疫情中多种不同技术路径的疫苗均用于防疫中，其中核酸疫苗带来重要变革。相信新的检测手段和方法会在疫苗领域有更广泛的应用。
参考文献：
1.《中国药典》2020版
2.《疫苗学》第一版
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