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水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定
SPE-UPLC-MS/MS法
2022年《国家食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2021年相比，水产品项下淡水虾、海水鱼、海水虾的检验项目中新增了GB 31656.11(第二法)液相色谱-串联质谱法，同时，在3.5.2.5中指定其为2022年2月1日(含)起的指定检验方法。《GB 31656.11-2021 食品安全国家标准 水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定》为2021年9月16日发布的中华人民共和国农业农村部公告 第388号36项食品安全国家标准之一。
迪马科技参考GB 31656.11-2021标准，建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定水产品中4种四环素类药物残留量，利用Mcllvaine缓冲液(pH 4.0)提取，ProElut PLS净化，Leapsil C18色谱柱分离检测；定量限与标准方法一致，为10.0μg/kg；回收率在70%-110%之间。
01
适用范围
本方案适用于鱼、虾、蟹、鳖及海参等水产品可食组织中土霉素、四环金、金霉素和多西环素残留量的检测。
02
标准品配制
(1) 单标储备液：分别称取适量盐酸四环素、盐酸土霉素、盐酸金霉素及盐酸多西环素，用甲醇配制成1.0mg/mL的单标储备液；
(2) 混合标准中间液：分别吸取适量单标储备液，用甲醇配制成1.0μg/mL和0.1μg/mL的中间液。
03
提取
(1)取2.0g样品于50mL离心管中，加入6mL Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液*和2mL乙酸铅溶液*，涡旋混合1min，超声10min，8000rpm离心2min；
(2)取出上清液，然后下层残渣依次加入5mL、5mL Na2EDTA- Mcllvaine缓冲液，按照步骤(1)重复提取2次；
(3)合并三次提取液，并用Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液定容至20mL；
(4)加入10mL正己烷，涡旋混合1min，8000rpm离心2min，取下层清液10mL待净化。
*Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(pH 4.0)：称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 27.6g、柠檬酸(C6H8O7·H2O) 12.9g、乙二胺四乙酸二钠盐37.2g，用水溶解后稀释并定容至1000mL。
*乙酸铅溶液：称取20g乙酸铅，用水定容至1000mL。
04
净化
ProElut PLS 60mg/3mL (Cat.#: 68003)
(1)活化：依次用5mL甲醇、5mL水活化；
(2)上样：加入待净化液，弃去流出液；
(3)淋洗：依次用5mL 水、5mL 5%甲醇水淋洗，弃去流出液，小柱真空负压抽干5min；
(4)洗脱：加入5mL 乙酸乙酯-甲醇(1:9)溶液，推干小柱，接收全部流出液混匀；
(5)重新溶解：将流出液在45℃下氮吹近干，用初始流动相定容至1mL，过Nylon膜(Cat.#: 37177)，供LC-MS/MS分析。
注：同方法制备基质匹配标准溶液。
05
分析条件
UPLC条件
色谱柱：Leapsil C18, 100x2.1mm 2.7μm (Cat#：86005)
流速：0.2mL/min
进样量：5μL
柱温：35℃
流动相：A:0.1%甲酸水溶液 B:乙腈
梯度设置：
质谱条件
电离模式：ESI
扫描方式：正离子扫描
检测方式：多反应监测
电喷雾电压：5500V
雾化气压力：50psi
辅助气压力：50psi
气帘气压力：20psi
离子源温度：500℃
06
添加回收结果
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