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色谱仪技术指标及流动相溶剂的要求

2020.8.03
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qi

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  高效液相色谱仪与气相色谱仪的进样方式、流动相、流动相与样品的作用、流动相粘度、流动相流动压力、固定相粒度、柱温、样品回收和应用范围等技术指标的差别如下:

  一、进样方式:

  1、高效液相色谱仪:样品制成溶液。

  2、气相色谱仪:样品需加热气化或裂解且不分解。

  二、流动相:

  1、高效液相色谱仪:可选用不同性质的各种溶剂。

  2、气相色谱仪:惰性气体。

  三、流动相与样品的作用:

  1、高效液相色谱仪:可发生作用,能改善分离选择性。

  2、气相色谱仪:不发生作用。

  四、流动相粘度:

  1、高效液相色谱仪:10ˉ3Pa·S

  2、气相色谱仪:10ˉ5Pa·S

  五、流动相流动压力:

  1、高效液相色谱仪:2~20MPa

  2、气相色谱仪:1~0.5MPa

  六、固定相粒度:

  1、高效液相色谱仪:5~10um

  2、气相色谱仪:0.1超临界流体色谱仪(SFC)~0.5mm

  七、柱温:

  1、高效液相色谱仪:常温

  2、气相色谱仪:常温~300℃

  八、样品回收:

  1、高效液相色谱仪:容易且可定量,适合大量制备。

  2、气相色谱仪:困难。

  九、应用范围:

  1、高效液相色谱仪:沸点高、极性强、稳定性差、分子量大的化合物和离子化合物。

  2、气相色谱仪:稳定性好和易气化的化合物。

  一、溶剂对于待测样品必须具有合适的极性和良好的选择性。

  二、溶剂要与检测器匹配:

  1、对于紫外吸收检测器,应选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长长。

  溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时,溶剂对此辐射产生强烈吸收,此时溶剂被看作是光学不透明的,会严重干扰组分的吸收检测。

  2、对于示差折光检测器,要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相,以达最高灵敏度。

  三、高纯度:

  由于高效液相色谱灵敏度高,超临界流体色谱仪(SFC)对流动相溶剂的纯度要求也高,不纯的溶剂会引起基线不稳或产生伪峰,痕量杂质将使截止波长值增加50~100nm。

  四、化学稳定性好:

  不能选用与样品发生反应和聚合的溶剂。

  五、低粘度:

  常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇和乙腈等。

  若溶剂粘度高,会增高压力,不利于分离。但溶剂粘度过低(如戊烷等),易在色谱柱和检测器内形成气泡,影响分离。

  【铁皮石斛】

  铁皮石斛为兰科植物铁皮石斛Dendrobiumoffi---cinaleKimuraetMigo的干燥茎,具有益胃生津,滋阴清热之功效,因其特殊的生存环境和卓著的滋补功效名列“中华九大仙草”之首。由于石斛药材在化学成分和结构组织上具有一定相似性,使鉴定和质量评价工作较困难。目前常用的方法之一是高效液相色谱法,《中国药典》2015第一部规定:供试品色谱中,甘露糖与葡萄糖的峰面积比应为(2.4~8.0);所采用高效液相色谱的理论塔板数超临界流体色谱仪(SFC)按甘露糖峰计算应不低于4000;按干燥品计算,含甘露糖(CHO)应为(13.0~38.0)%。

  【样品制备】

  (校正因子计算)取盐酸氨基葡萄糖适量,配置成1ml含12mg的溶液,作为内标溶液。另取甘露糖对照品置于容量瓶中,加入内标溶液,加水适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,吸取400μl,加入PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)甲醇溶液与氢氧化钠溶液各400μl,混匀,加热水浴反应。再加盐酸溶液混匀,用三氯甲烷洗涤,弃去三氯甲烷液,水层离心后,取上清液10μl,注入测定,计算校正因子。

  (铁皮石斛样品制备)取本品粉末0.1219g,置提取器中,乙醇加热回流提取,弃去乙醇液,药淹挥干乙醇,滤纸筒拆开置于烧杯中,加水再加入内标溶液,搅拌下煎煮小时,室温加水、混匀,离心,吸取上清液适量置顶空瓶中,加盐酸溶液、封口,混匀、水解、放冷,用氢氧化钠溶液调节pH值至中性,取上清液注入液相色谱仪,测定,即得。

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