中国药品标准体系不断完善，医药生物产业全面升级，步入高质量发展的产业趋势。ADC和双抗药物将成为带动生物医药行业格局发生变化的主流技术，为此默克举办了四期新型抗体研讨会，专注于工艺开发与质量研究，与行业顶流共同探讨分享新型抗体药物的变革发展之路。研讨会直播期间，很多听众都积极提问，与授课专家交流实际工艺研发与生产过程中遇到的相关问题。
第一期课程中，《ADC药物工艺开发，优化及放大概述》探讨了偶联工艺开发的挑战及ADC工艺优化放大策略。《ADC工艺流程关键考量因素分析及应用介绍》对ADC工艺流程中多个关键步骤的需求与挑战进行剖析，结合实际应用案例阐述ADC工艺开发的考量点及相应的解决方案。
ADC工艺开发TFF相关
Q
ADC反应液中小分子不易于通过TFF去除时，一般通过怎么调整TFF工艺来更有利于去除小分子呢？
A
通常是增加洗滤体积进行小分子的去除，但是在一些特殊的案例中由于连接子复合物具有较高的疏水性，在缓冲液中有可能发生自缔合作用，产生难溶性胶束，这些胶束则难以通过UF/DF步骤去除，通常需要配合后续相关层析工艺进行去除。
Q
毒素一般不溶于水，超滤时如何保证透过膜包，残留少？
A
小分子毒素通常是先溶解于有机溶剂中，再进行后续的偶联反应。并且通常小分子毒素与ADC分子的分子量差异较大，超滤过程中小分子会透过膜进行去除，需要注意的是有机溶剂的引入对超滤膜包的兼容性有一定的挑战，在工艺开发时需要关注。
第二期课程中，《ADC药物CMC法规监管及注意要点》依据ADC药物产品的特性，着重介绍了这类产品的法规监管要点和注意事项。《ADC药物应用一次性技术生产的关键考量》则针对偶联、毒素去除、原液制备等关键步骤的工艺，结合实际应用案例介绍用户考量和应对方案，并对一次性技术使用过程中文件需求和验证支持做了对应介绍。
默克文件支持相关
Q
要做上市申报，默克这边能提供哪些文件方面的支持？
A
默克可以提供的文件包括：
1) 操作指南，知道耗材和硬件的安装使用
2) 白皮书，分享默克在一次性方面的行业经验，以及细分法规的解读
3) 应用指南，包括工艺缩放指导、生物制品搅拌性能研究 、特殊料液搅拌指导以及特殊实验条件验证，节省用户工艺开发时间
4) 按照CTD格式整理的Emprove®文件体系。包含：
- 材料确认档案：用于材料确认的所有信息。包括物料的常规信息、制造流程图、产品特性和鉴定、设计和发布标准、组成材料、可提取物摘要、溶残证明、杂质声明、法规声明（动物来源、双酚A）等内容
- 质量管理档案：用于质量风险评估的信息。包括质量自评、供应商和CMO 管理、效期测试及结果、包装和灭菌验证等内容
- 卓越运营档案：用于支持工艺优化。包括完整可提取物报告、元素杂质信息和分析步骤等内容
一次性组件相关
Q
袋子具体可以耐受哪些有机溶剂，耐受浓度是多少，溶出数据满足目前法规要求吗？
A
默克内部考虑到ADC生产常用溶剂的常用浓度，对20% DMAC和DMSO进行了实验验证，在24小时的连续浸泡或系统运行后，一次性组件没有出现泄露，也没有观察到会导致无法使用的物理性质的变化。对实验后的一次性组件进行溶出分析，所有析出的金属元素均不是在ICH Q3D指导中列出的风险元素杂质。挥发、半挥发和不挥发的有机化合物检测中，没有一种化合物的浓度超过100ppb。总体溶出数据符合法规要求。
对于超过20%浓度的有机溶剂，或者有其他有机溶剂的使用需求（如DMF），默克验证实验室可以提供相关验证服务和支持，为用户的验证申报保驾护航。
第三期课程中，《双抗药物工艺开发策略》探讨了双抗工艺开发不同阶段的关注要点，开发策略，及如何最终生产出符合质量要求的产品。《双抗上游工艺的挑战与策略》着重于双抗表达量低易形成聚体和质量不稳定的问题，结合实际案例，分享了从细胞株开发、培养基定制开发到灌流工艺的解决方案。
双抗上游工艺相关
Q
双抗中经常遇到需要同时表达两个以上序列的情况，如果希望高效地共表达两个以上序列并组成双抗，在载体构建和转染过程中有没有推荐的优化策略呢?
A
如何选择表达系统和配套质粒进行高效的双抗表达，非常却决于双抗本身的结构特点。是有Fc区的全长双抗是无Fc区的片段双抗；对称结构的双抗还是非对称结构的双抗；是几条目的基因序列，这些因素都会影响表达系统的选择和质粒构建的方案，需要具体案例具体分析。就全长双抗，一般来说，想要提高表达，可以考虑使用一些元件，如UCOE®，insulator等等，起到防止甲基化沉默和位置效应，提高目的基因的表达；也可以考虑转座子介导的DNA整合系统，如Sleeping Beauty，PiggyBac，将多个目的基因片段进行整合；如果需双质粒共同表达，则需要配套双代谢/加压筛选系统，前期需要不同质粒转染比例的优化。
Q
数据驱动的培养基开发有什么优势？
A
基于多元多变量模型的培养基优化策略以数据为导向，精确高效的调节培养基组分以达到目标产量和质量参数；而传统的培养基优化策略是类似于一个trial and error的过程，需要重复实验，试错成本高并且很难达到预期的产量和质量参数。
第四期课程中，《双抗药物质量控制策略》介绍了双抗药物质量控制平台，并带来实际案例分析。而《双抗下游工艺挑战及应对策略》则针对澄清、层析、除病毒、TFF等关键步骤，结合应用案例分析双抗工艺开发中由于双抗不稳定、杂质去除等带来的挑战，并总结了默克双抗下游解决方案。
双抗工艺除病毒相关
Q
inline spiking具体的工作原理可以再详细介绍一下吗？如何实现验证过滤通量提升的?
A
1）inline spiking是指，病毒清除验证中采用预过滤器和除病毒滤器串联，在预过滤与除病毒膜之间在线添加病毒。当过滤开始时，病毒原液将会持续地加入，和预过滤后的料液按比例在线静态混合后，被持续地取样，最终被除病毒过滤器过滤。2）一般我们去做除病毒验证时，先用预过滤对加病毒样品进行过滤，预过滤后料液可能静置一段时间，样品在这段时间可能重新产生堵膜杂质，最终导致除病毒过滤发生堵塞以及载量降低的情况，Inline Spiking可以解决验证过程中除病毒滤器载量下降的情况。
双抗工艺层析相关
Q
是否遇到过双抗分子裂解片段杂质问题，一般采用什么方式去除？
A
是。可以先采用单一模式的阳离子交换层析，比如Eshmuno® CPX，通过盐离子或者pH梯度进行洗脱，如果分离效果不好，可以再尝试混合模式，比如Eshmuno® CMX。
第一期 ADC药物工艺开发，优化及放大概述 & ADC工艺流程关键考量因素分析及应用介绍
第二期 ADC药物CMC法规监管及注意要点 & ADC药物应用一次性技术生产的关键考量
第三期 双抗药物工艺开发策略 & 双抗上游工艺的挑战与策略
第四期 双抗药物质量控制策略 & 双抗下游工艺挑战及应对策略
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