高效液相色谱仪应用举例（四）

例12.甾族化合物分析

样 品：含孕酮等4种物质的混合物

色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，四元梯度泵，色谱工作站

检测器：Mark ⅡA型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为135℃，氮气流速为1.2L/min。

色谱柱：Hyperil C18 ,5μm，柱长25cm，柱径4.6mm

流动相：甲醇:水 = 70:30

流 速：1.2mL/min

进 样：20μL

结 果：所有组分在12min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为氢化可的松，峰2 为强的松，峰3为睾酮，峰4为孕酮。

例13.皮质醇分析

样 品：含皮质醇等5种物质的混合物

色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站

检测器：荧光检测器，流动池30μL

激发波长370nm ,检测波长480nm，狭缝均为20nm

色谱柱：Finepak C18 ，10μm，柱长25cm，柱径4.6mm

流动相：甲醇:水 = 50:100(v/v)

流 速：0.8 mL/min

进 样：20μL

结 果：所有组分70min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为皮质醇保留时间15.8min，峰2为β-Methasone保留时间20.0min，峰3为四氢皮质酮保留时间22.5min，峰4为四反皮质醇保留时间32.5 min，峰5为四氢-11-脱氧皮质醇保留时间65.8min。

例14.胆固醇分析

样 品：含胆固醇等6组分的混合物

色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站

检测器：ELSD美国Alltech MKⅢ蒸发激光散射检测器

漂移管温度为65℃，氮气流速为2.0L/min。

色谱柱：Allsphere Silica ，3μm，柱长10cm，柱径4.6mm

流动相：A为离子对试剂，B为正己烷，C为水

梯 度：时间 0min 7min 15min

A 58% 52% 52%

B 40% 40% 40%

C 2% 8% 8%

流 速：1.25mL/min

进 样：20μL

结 果：所有组分在13min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为胆固醇，峰2为棕榈酸，峰3为磷脂酰乙醇胺，峰4为磷脂酰丝氨酸，峰5为磷脂酰胆碱，峰6为神经鞘磷脂。

例15.磷脂分析(生物)

样 品：含磷脂酰肌醇等4种物质混合物

色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，四元梯度泵，色谱工作站

检测器：500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为120℃，氮气流速为2.7L/min。

色谱柱：Rosil NH2 ，5μm，柱长15cm，柱径4.6mm

流动相：A为无水乙醇，B为0.2mol/L的草酸溶液

梯 度：时间 0min 15min 30min 30.1min 35.1min

A 95% 85% 85% 95% 95%

B 5% 15% 15% 5% 5%

流 速：1.5mL/min

进 样：10μL

结 果：所有组分在35min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为磷脂酰乙醇胺, 峰2为磷脂酰丝氨酸, 峰3为磷脂酰胆碱, 峰4为磷脂酰肌醇。