流式细胞仪的激光源和光学系统相关

　　经特异 荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。常用的光源有弧光灯和激光；激光器又以 氩离子激光器为普遍，也有配和 氪离子激光器或染料激光器。光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定。汞灯是最常用的弧光灯，其发射光谱大部分集中于300～400nm，很适合需要用紫外光激发的场合。 氩离子激光器的发射 光谱中，绿光514nm和蓝光488nm的谱线最强，约占总光强的80%； 氪离子激光器光谱多集中在 可见光部分，以647nm较强。免疫学上使用的一些 荧光染料激发光 波长在550nm以上，可使用染料激光器。将有机染料做为激光器泵浦的一种成份，可使原激光器的 光谱发生改变以适应需要即构成染料激光器。例如用 氩离子激光器的绿光泵浦含有Rhodamine6G水溶液的染料激光器,则可得到550～650nm连续可调的激光，尤在590nm处 转换效率最高，约可占到一半。为使细胞得到均匀照射，并提高 分辨率，照射到细胞上的激光光斑直径应和细胞直径相近。因此需将激光光束经 透镜会聚。光斑直径d可由下式确定：d=4λf/πD。λ为激光 波长；f为 透镜焦距；D为激光束直径。 色散棱镜用来选择激光的 波长，调整反射镜的角度使调谐到所需要的 波长λ。为了进一步使检测的发射 荧光更强，并提高荧光讯号的信噪比，在 光路中还使用了多种滤片。带阻或带通滤片是有选择性地使某一滤长区段的 光线滤除或通过。例如使用525nm带通滤片只允许FITC（Fluoresceinisothiocyanate,异 硫氰 荧光素）发射的525nm绿光通过。长波通过 二向色性反射镜只允许某一 波长以上的 光线通过而将此波长以下的另一特定波长的光线反射。在免疫分析中常要同时探测两种以上的波长的 荧光信号，就采用 二向色性反射镜，或二向色性分光器，来有效地将各种荧光分开。