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免疫酶标技术——间接法

2019.4.07
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身
实验方法原理将酶标记在第二抗体上，再与已形成的抗原抗体复合物中的第一抗体反应。目前广泛应用的PAP法、ABC法是在间接法的原理和技术的基础上发展起来的。
实验材料

抗体

试剂、试剂盒

PBSH2O2血清

仪器、耗材

显微镜

实验步骤

1.  标本固定；


2.  PBS洗涤2×3 分钟；


3.  1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）抑制内源性过氧化物酶，室温10～20 分钟；


4.  正常血清（1：10）孵育，室温20 分钟；

5.  滴加第一抗体，37 ℃1 小时或4 ℃过夜；


6.  PBS洗3×3 分钟；


7.  滴加酶标二抗，室温一小时；


8.  PBS洗3×3 分钟；


9.  0.04 %DAB+0.03 %H2O2显色5～10 分钟；


10.  充分水洗后，复染、脱水、透明、封片、镜检。

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注意事项

间接法比直接法敏感，能增加染色强度，操作也较简便。缺点是非特异染色较重，敏感性较低。


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