（1）在盛尿容器内加浓盐酸5ml作防腐剂。收集24h尿液，混匀，并量取总量。
（2）取尿样5ml，放入20mm×150mm试管中，加浓盐酸15ml；在沸水浴中煮沸20min，取出，置冷水中冷却。
（3）冷却尿样移入30ml小分液漏斗，加乙醚10ml，振摇2min，放置待分层后弃去下层尿液。
（4）向小漏斗中加入1mol/L氢氧化钠5ml，轻摇1min，洗乙醚，放置澄清，弃去下层水相。
（5）再用蒸馏水2.5ml，轻摇洗乙醚1min，放置澄清，弃去下层水相。
（6）将乙醚移入15ml试管中，于40～45℃水浴中蒸干，此管即为测定管。
（7）按表1进行操作，设测定管、标准管（内含雄性酮标准0.01mg）、空白管。
将各管混匀，同时在1000r/min离心2min，取上层溶液移入10mm光径比色杯中。520nm波长，以空白调零，读取各管的吸光度。
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