分析测试百科网

搜索

喜欢作者

微信支付微信支付
×

多肽合成与修饰技术

2021.2.23
头像

王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

实验技术:多肽 合成是一个固相合成顺序一般从C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来,经过不断的改进 和完善,到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术,表现出了经典液相合成法无法比拟的优点,从而大大的减轻了每步产品提纯的难度。多肽合成总的来说分成两种:固相合成和液相多肽合成。

实验技术原理:

多肽合成仪以固相合成为反应原理,在密闭的防爆玻璃反应器中使氨基酸按照已知顺序(序列,一般从C端-羧基端 向 N端-氨基端)不断添加、反应、合成,操作最终得到多肽载体。固相合成法,大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生,参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。羧基端是游离的,并且在反应之前必须活化。

实验操作流程:

1、去保护:Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂(piperidine)去除氨基的保护基团。
2、激活和交联:下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反应交联,形成肽键。在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反应完成。循环:这两步反应反复循环直到合成完成。
3、洗脱和脱保护:多肽从柱上洗脱下来,其保护基团被一种脱保护剂(TFA)洗脱和脱保护。

多肽修饰类型:

1、C端标记技术 :
C端酰胺化(Amidation,C-termainal)、醛基化(Aldehydes)、醇基化(Alcohols)、pNA (p-Nitroanilide)
AMC、AFC、巯基乙胺化(Cysteamide)、酯基化(Ester)、N-烷基化(N-Alkyl Amides)等

2、N端标记技术 :
乙酰化Acetylated (Acetylated)、Palmytolyl、HYNIC、生物素标记(Biotinylated)、Br乙酰化(Bromoacetylated)
螯合反应(DOTA,DTPA conjugated)、甲醛化(Formylated)、十四烷基、十八烷基化(Myristoylated)
琥珀酰化、棕榈酸化、苹果酸化、脂肪酸化等(Succinylated)

3、荧光标记修饰:
C端修饰:AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110
N端修饰:Biotin, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-Fam,5-Fitc等
Rhodamine 110 and Rhodamine B Luciferin, EDANS
FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamine 101, 5-TAMRA

4、环化反应:
首尾成环,中间成环,特殊成环(N -> C or Head to Tail)
2对二硫键,3对二硫键(Disulfide (S-S bond formation) .Trisulfide formation)
天然产物活性肽成环(Cyclic-natural peptides )

5、甲基化修饰:
侧链甲基化Lys(For),Lys(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)
N端甲基化(N-Me-Arg,N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N- Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val)

6、几种特殊修饰:
各 种偶联(BSA, KLH conjugated peptides for antibody production )、磷酸化(Phosphoserine, Phosphothreonine, Phosphotyrosine)、磺化(Sulfated Tyrosine or Serine)、MAPS (Multiple Antigenic Peptide)、糖肽(Glycopeptides)、 PEG修饰(PEGylation)

实验注意事项:
客户提供:
1、多肽序列、数量、纯度及特殊要求
2、冻干多肽可在-20度保存或室温保存
3、溶液肽远比冻干形式不稳定,溶液应为中性PH(5-7)-20度保存。
4、为避免样品的反复冻融,最好分成小样存放。

互联网
文章推荐