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脐带
胶原酶消化液PBS
注射器离心管培养基
1. 取产后的新鲜脐带;如不立即培养可保存于4 ℃中,但不宜超过12 小时;无菌剪取长10~15 厘米一段。其它如胚胎和幼体动物的大血管,亦可用于培养;
2. 先用三通注射器吸温PBS液注入脐带的脐静脉中,洗除残血;注入口处宜用线绳结扎,以防液体返流;
3. 用血管钳夹紧脐带一端,从另端向脐静脉中徐徐注入最终浓度为0.1 %的胶原酶,待末端出现液体后结扎之,令充满血管,注入口应应结扎,以防液体返流,消化3~10 分钟;
4. 吸出含有内皮细胞的消化液,注入离心管中;为获取更多细胞,可再注入温PBS冲洗2~3 次彻底清除干净残余细胞,一并注入离心管中离心;
5. 吸除上清,加1640培养液,制成细胞悬液,接种入瓶皿中培养,顺利时2~3 天内细胞即可长成单层。
一、讨论内皮细胞生长后,开始细胞成梭形,类成纤维细胞,连接成片后始显内皮细胞形状。首次用胶原酶消化时,应做预试验,以找出最佳消化时间,以防止消化不足细胞未脱落,也避免因消化过度使内皮细胞底层成纤维细胞混入。我们曾试用胰蛋白酶消化,效果远不如胶原酶好。人脐带易于获得,培养效果好;细胞生生后,一般传6~7 代后即衰退,难以长期维持。用兔血管内皮细胞培养较好,可传10~30 代;不同部位血管内皮细胞生物学性状不同,对各种作用因素反应亦有很大差别。