实验方法原理 | 本方法由 Bowtell 法(1987) 改进而成,可同时从许多不同细胞或者组织样品中制备 DNA。本方案中的主要步骤包括将 DNA 沉淀在细胞裂解液和乙醇的交界面上,接着将沉淀的 DNA 缠绕到一个 Shepherd 氏钩上。缠在钩上的 DNA 从乙醇溶液中转出溶于所选择的液体缓冲液。这种收集高分子质量 DNA 沉淀的方法首次用于 20 世纪 30 年代。小片段 DNA 和 RNA 不能有效地整合入凝胶状缠绕物。这些 DNA 往往太小(约 80 kb),不能用于构建基因组 DNA 文库,但用于 Southern 杂交和聚合酶链反应则效果甚佳,也可用限制性内切核酸酶部分酶解后用于构建按大小进行分级的文库。1 ml 培养的非整倍体哺乳动物细胞(2.0X107 个,如 HeLa 细胞)能产生 100 μg DNA。 |
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实验材料 | λ 噬菌体的线性单体和多联体 哺乳类细胞、新鲜组织或血样 |
试剂、试剂盒 | 细胞裂解液 乙醇 TE |
仪器、耗材 | 脉冲电场凝胶或 0.6% 琼脂糖凝胶 Kimwipe 吸水纸 聚丙烯管 振荡平台 Shepherd 氏钩 宽口移液管 |
实验步骤 |
一、材料 展开 |