文库一旦包装就应该尽快进行扩增,它可以大大增加文库的拷贝数,但在扩增时由于克隆的生长速率不同,文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 在含抗生素的平板上,通过系列等比稀释确定质粒和粘粒文库的滴度,计算出最佳的铺平板用的细菌悬液量并稀释到5~10 ml LB培奍基中。
2. 准备一层无菌的10 cm 或15 cm的Whatman 3 MM 滤纸,故在玻璃布氏漏斗或瓷质过滤漏斗中,加入10~20 ml LB培养基。
4. 慢慢抽吸液体,待菌悬液被吸干之后,揭下滤膜并移至含抗生素的平板中,置于37℃培养,直至长出直径达1~2 mm 的菌落。 8. 在硝酸纤维素膜上覆盖3张20 cm×20 cm 的3 MM 滤纸,并同样大小的玻璃平板压在其上,转印克隆。
9. 移去压在滤膜上的玻璃平板和滤纸,用20-G针头在重叠的原滤膜和转印膜上刺一小孔以标记方向。
13. 接着,滤膜转印面朝上,依次放在3张分别饱蘸下面3种液体的46 cm×75 cm 3MM Whatman滤纸上5 min。 |