重组的果蝇 NAP－1 的表达和纯化实验2

见基本方案咪唑的 Superflow 层析缓冲液

见基本方案NTA Superflow 树脂（Qiagen）FPLC 柱

1. 实验前准备

主要材料见基本方案

附加材料

含有 20 mmol/L 和 500 mool/L 咪唑的 Superflow 层析缓冲液

NTA Superflow 树脂（Qiagen）

C-10/10 或 C-10/20 FPLC 柱（Amersham Pharmacia Biotech）

2. 使用FPLC，按每 500 ml 原细胞培养体积：1 ml NTA Superflow 树脂的比例，在 20% 乙醇中装好 NTA Superflow 柱。将柱装入 FPLC 装置中。

3. 用 5 倍柱体积的含有 20 mmol/L 咪唑的 Superflow 层析缓冲液平衡柱。将基本方案步骤 3 得到的上清上样到柱上。

4. 用 5 倍柱体积的含有 20 mmol/L 咪唑的 Superflow 层析缓冲液平衡柱。用 10 倍柱体积的含有 20 mmol/L 到 500 mmol/L 咪唑梯度的 Superflow 层析缓冲液洗脱蛋白质。

5. 每个组分各取 5 ul 进行 15% SDS-PAGE 凝胶电泳，合并蛋白峰。继续基本方案的步骤 6。