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tm值和引物中的GC含量有关 只要相差不是太大就行 设定时取平均值就可以;你可以根据引物的长度和GC的百分比来确定一下哪个更准确。不知道你用的那个公司的机器,一般是的在退火温度后面的空格里,输入你每个循环升或降的温度,后面还有加减号代表升或降。