概述香豆酸的提取流程

　　（1）准确称取样品100 mg于10 ml离心管中；

　　（2）沿着离心管壁加入5.0 ml去除空气的2.0 M NaOH溶液,小心充入N2,排出试管中的空气(充N2过程中需小心)；

　　（3） 39°C避光培养24h,期间隔一段时间摇晃一次,使饲料能被均勾充分的碱解。

　　或者

　　（1）准确称取词料样品100 mg于10 ml反应釜中(聚四氟乙稀内衬,不锈钢外套)；

　　（2）加入5.0 ml去除空气的4.0 M NaOH溶液,小心充入N2,排出试管中的空气(充N2过程中小心将样品吹出),盖好聚四氟乙稀盖和旋紧不锈钢盖；

　　（3）烘箱中170℃反应2 h,冷却后转移到10 ml离心管中。

　　以上两种方法释放出的酷酸萃取方法如下(整个过程需注意避光)：

　　（4）分别取上述溶液1.0 ml于新的离心管中,加入浓H3PO4,用精密pH试纸(0.5-5.0)将pH调至2.0以下,混匀后4°C过夜。

　　（5）向试管中加入4.0 ml乙酸乙酷,祸动2 min,使其充分混勾,6000 g离心15 min,取上清液(因样品不同,有时离心后会出现胶冻样层,因此,此步骤中离心转速需根据不同的样品进行调整。如果出现胶冻样层,此时需加大转速或增加离心时间)；

　　（6）重复步骤(5),将两次上清混合；

　　（7）N2吹干仪将乙酸乙酯吹干,

　　（8）加入1.0 ml甲醇复溶,祸动1min,过0.45微摩针孔滤膜,进行液相检测,根据色谱峰的面积计算词料中香豆酸的含量。