在基本的双晩氧测序反应中,寡核苷酸引物退火于单链DNA摸板,在4种脱氧核糖核酸三磷酸存在时,引物为DNA聚合酶所延伸。反应混合物中也含有4种双脱氧核糖核苷三磷酸的其中一种,当它掺入到DNA的生长链时,可终止链的延伸。
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 对于每个单链模板:将下列试剂混合于0.5 ml 微量离心管中
2. 对于每个双链DNA模板:以下列混合液重溶含0.5 pmol 变性双链模板的干燥沉淀物。
3. 当引物正和模板退火时,对应每个待测模板,分别标记好A、C、G、T 4个微量离心管。
3. 分别加入2.5 μl A、C、G、T 测序酶终止混合液至A、C、G、T管的底部
5. 将下列试剂加入已退火的引物和模板中
6. 加入3.5 μl 标记反应物至含测序酶终止混合物A的微量离心管中。
8. 加入4 μl 终止/加样染料液,于95℃水浴2 min,然后置于冰浴。 |