胰激肽原酶的效价测定方法

酶活力照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定供试品溶液取本品适量,精密称定,加纯度项下的磷酸盐缓冲液(pH7.0)适量使溶解并定量稀释制成每1ml中约含10单位的溶液。标准品溶液取胰激肽原酶标准品,按标示单位,加上述磷酸盐缓冲液(pH7.0)适量使溶解并定量稀释制成每1m中含10单位的溶液。底物溶液取N-苯甲酰L精氨酸乙酯盐酸盐17.7mg,加三羟甲基氨基甲烷缓冲液(称取三羟甲基氨基甲烷12.14g:加水800ml溶解,用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0,用水稀释至1000ml)适量使溶解并稀释至100ml,4℃保存测定法取25℃士0.5℃水浴中预热的底物溶液2.5ml,置1cm比色池中,分别精密加入供试品溶液或标准品溶液0.1ml,混匀,立即计时,使比色池内的温度保持在25℃±0.5℃,在253nm波长处,以底物溶液为空白,准确读取1分钟时的吸光度A0和3分钟时的吸光度A,标准品溶液和供试品溶液需平行测定3次,分别求得标准品溶液和供试品溶液的△A值(△A=A-Ao)的平均值,代入下式计算。△A:XP3×n△A.xW式中P为每1mg供试品中含胰激肽原酶的量,单位;△A为供试品溶液的△A值的平均值;△A为标准品溶液的△A值的平均值P为标准品溶液的单位数;n为稀释倍数;W为供试品量,mg蛋白含量取本品约10mg,精密称定,照蛋白质含量测定法(通则0731第一法)测定,即得。比活由测得的酶活力和蛋白含量计算每1mg蛋白中含胰激肽原酶的单位数,即得。