FDA关于粗品肝素钠来源检测的方法（二）

l. 上下吹打5次混匀。
m. 室温孵育1min。
n. 把离心管放到MagnaRack上直至ChargeSwitch Magnetic Beads形成紧密沉淀，上清变清澈（约
1min）。
o. 离心管留在磁铁上，小心吸掉上清不搅浑沉淀。吸取上清时枪头不要对着沉淀物。
p. 从磁铁取下离心管。
q. 加入1ml ChargeSwitch Wash Buffer到离心管，上下吹打5次混匀。
r. 把离心管放到MagnaRack上直至ChargeSwitch Magnetic Beads形成紧密沉淀，上清变清澈（约
1min）。
s. 离心管留在磁铁上，小心吸掉上清不搅浑沉淀。吸取上清时枪头不要对着沉淀物。
t. 从磁铁取下离心管。
u. 加入750μl  ChargeSwitch Wash Buffer到离心管，上下吹打5次混匀。
v. 把离心管放到MagnaRack上直至ChargeSwitch Magnetic Beads形成紧密沉淀，上清变清澈（约
1min）。
w. 离心管留在磁铁上，小心吸掉上清不搅浑沉淀。吸取上清时枪头不要对着沉淀物。
x. 加入750μl  ChargeSwitch Wash Buffer到离心管，上下吹打5次混匀。
y. 把离心管放到MagnaRack上直至ChargeSwitch Magnetic Beads形成紧密沉淀，上清变清澈（约
1min）。
z. 离心管留在磁铁上，小心吸掉上清不搅浑沉淀。吸取上清时枪头不要对着沉淀物。最后一次
清洗，吸掉所有上清。
aa. 从磁铁取下离心管，此时管内不应有上清液。
bb. 加入75μl ChargeSwitch Elution Buffer（E5）到离心管。
cc. 轻轻上下吹打10次重悬ChargeSwitch Magnetic Beads。
dd. 室温孵育1min。
ee. 把离心管放到MagnaRack上直至ChargeSwitch Magnetic Beads形成紧密沉淀，上清变清澈（约
1min）。
ff. 离心管留在磁铁上，小心转移含有DNA的上清到一个新的灭菌了的2ml离心管中，勿搅动
沉淀。吸取上清时，枪头不要对着沉淀。
gg. 弃去用过了的ChargeSwitch Magnetic Beads。
*DNA -20℃冷冻保存或继续进行DNA纯化去杂质
 
2. DNA纯化去杂质 
介绍：
下文描述如何去除以上提取的肝素钠粗品DNA 中PCR抑制因子（如肝素）。在纯化去杂质开始前需通读整篇标准操作流程。本段使用MOBIO（Carlsbad, CA）的PowerClean® DNA Clean-Up Kit。试剂盒提供的所有试剂盒离心管均DNase free。
 
2.1. 操作步骤
a. 加入75μl nuclease free水到DNA样品中。
b. 加入750μl PowerClean DNA Solution 1到DNA中。上下颠倒3-5次混匀。
c. 加入20μl PowerClean DNA Solution 2，上下颠倒3-5次混匀。 
注意：检查PowerClean DNA Solution 2，若有沉淀，60℃水浴并轻摇直至沉淀全部溶解。不要剧烈摇晃以免产生大量泡沫。可趁热使用。
d. 加入85μl PowerClean DNA Solution 3，上下颠倒3-5次混匀。4℃孵育5min。
e. 室温10000g离心1min。
f. 避开沉淀，转移所有上清到一个干净的2ml Collection Tube（试剂盒提供）中。
g. 加入70μl PowerClean DNA Solution 4，上下颠倒3-5次混匀。4℃孵育5min。
h. 室温10000g离心1min。
i. 避开沉淀，把上清转移到一个干净的2ml Collection Tube（试剂盒提供）中。
j. 摇匀PowerClean DNA Solution 5。加入800μl PowerClean DNA Isolation 5到上清中，涡旋5s
混匀。
k. 加载600μl上清液到Spin Filter中，室温10000g离心1min。
l. 弃去滤液，把剩余的600μl上清都加到Spin Filter上，室温10000g离心1min。
m. 弃去滤液。加入500μl PowerClean DNA Solution 6到Spin Filer，室温10000g离心30s。
n. 弃去滤膜。
o. 室温13000g离心2min。
p. 小心把Spin Filter转移到一个新的2ml Collection tube（试剂盒提供）中。避免沾到任何PowerClean DNA Isolation 6。
q. 加入75μl PowerClean DNA Solution 7到白色滤膜中心。
r. 室温10000g离心30s。
s. 弃去Spin Filter。-20℃冷冻保存直至PCR扩增。