酵母实验操作方案（2)

附录一 培养基

LB：
Tryptone 10g 1%
Yeast Extract 5g 0.5%
NaCl 5g 0.5%
【Agar】 15g 1.5%（固体培养基另加）
dH₂O稀释至1L，高压灭菌
YPD：
Yeast Extract 10g 1%
Peptone 20g 2%
【Arga】 20g 2％（固体培养基另加）
dH₂O 900ml 高压灭菌，冷却至60度，加
10×Dextrose 100ml
YPD－G418：
250ml YPD加10×Dextrose后加适量G418，注意轻摇混匀，不要产生气泡，同时留空白对照板。

MD：
YNB 3.4g 0.34%
【Sorbitol】 182.2g 1M
【Agar】 15­-20g 1.5%-2%
dH₂O 800ml
高压灭菌，冷却至60度，加
10×(NH₄)₂SO₄ 100ml 1%
500×biotin 2ml 4×10^－5％
10×Dextrose 100ml 1％
MGY：
YNB 3.4g 0.34%
dH₂O 800ml
高压灭菌，冷却至60度，加
10×(NH₄)₂SO₄ 100ml 1%
10×Glycerol 100ml 1%
500×biotin 2ml 4×10^－5％
BMMY：
Yeast Extract 10g 1%
Peptone 20g 2%
YNB 3.4g 0.34%
K2HPO4 3.013g
KH2PO4 11.813g (PH6.0 缓冲液)
dH₂O 900ml
高压灭菌，冷却至60度，加
10×(NH₄)₂SO₄ 100ml 1%
每次使用之前，分装后加2/1000体积
500×biotin 2ml 4×10^－5％
连接产物的质粒转化
1）－70⁰C取出Top10感受态细胞，50ul/管，取出后迅速分装城10ul或20ul/管；
2）冰浴30min；
3）42⁰C，30秒（精确计时），置于冰水1－2min；
4）加等体积37⁰C预热的SOC培养基；
5）37⁰C，225rpm，培养45min；
6）100ul分别涂板，37⁰C培养；