实验概要
小鼠胚胎成纤维细胞传代培养
主要试剂
0.05%Trypsin、细胞基础培养液、DPBS
主要设备
100 mm培养皿、15 mL离心管、倒置显微镜
实验步骤
（1）预先37℃温热细胞基础培养液及0.05%Trypsin。
（2）用枪头吸弃培养皿中的培养液，并用DPBS冲洗一遍，然后加入2 mL 0.05%Trypsin(100 mm培养皿)，37℃培养箱内孵育3min。
（3）显微镜下观察细胞变圆、漂起，可加2 mL细胞基础培养液终止消化。
（4）将细胞转移到15 mL离心管中，室温1000 r/min离心3 min，去上清。
（5）用6 mL细胞基础培养液重悬细胞，按1:3比例接种至新的培养皿，补充培养液到100 mm培养皿，一般100 mm培养皿8 mL液体。
！注意：1. MEF传代时密度应适当，不能过密，也不能过稀，密度适当的MEF可以按照1∶3的比例进行传代。
2. 因为小鼠细胞易老化，制备饲养层细胞要求使用前三代的细胞。
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