AFP异质体的测定方法介绍

2022.6.17

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材料

标本来源

收集本院20例AFP阳性(>20 μg/L)患儿血清标本，年龄均<12岁（中位年龄3个月）。其中胚芽细胞肿瘤8例、肝母细胞瘤2例、肝细胞癌1例、先天性胆道闭锁4例、患有其他疾病的血清标本5例，肿瘤病例均经病理确诊。

试剂和仪器

试剂：(1)刀豆素A(Con A，美国Sigma公司），(2) 巴比妥-巴比妥钠缓冲液(0.02 mol/L，pH 8.6)，(3) 1%琼脂糖溶液，(4)125I同位素干粉和AFP抗血清干粉（上海生物制品研究所）。

仪器：(1)IMx(美国Abbott)，(2)电泳仪SCR-300型。

方法

AFP定量：按Abbott的IMX仪操作说明书进行测定。

AFP异质体测定：

称取5mg ConA加入0.2 ml缓冲液溶解，置56℃预温，再加入已预温至56℃的1%琼脂糖溶液5 ml，混匀，在6 cm×10cm玻璃板一侧浇注2cm×10cm的凝胶条。距阴极端1.5cm处加入50μl待检血清及3μl溴酚兰，纱布搭桥，平衡后作第一向亲和电泳(140 v, 1.5～2 h)。

吸取1%琼脂糖溶液10 ml，加0.12 ml AFP抗血清，混匀，浇注入玻板的剩余部分。再在第一向亲和电泳凝胶条上，血清电泳行径的阴极侧，切割0.3 cm×7 cm的狭槽，以含5～10 μl 125　I琼脂糖溶液充填，与第一向免疫电泳垂直做第二向免疫电泳(50 v, 16～18 h)。

电泳结束后，将凝胶板置于80～90℃的水浴锅上烘干约1 h。在暗房中覆盖X胶片自行曝光48 h，冲洗成像。

计算：在亲和交叉免疫电泳自显影图中通常可出现2个峰，靠近加样端峰为结合型AFP(R波)，远离加样端峰为非结合型AFP(NR波)。干燥后将底片置于小方格纸上(每格1 mm2)，计数两峰各自所占的小格数，按下式计算NR波的百分比[2]：NR(%)=(NR波所占小格数)/(R波所占小格数+NR波所占小格数)×100%

结果

AFP异质体电泳图像呈3种典型类型：良性肝脏疾病型(BLD)，卵黄囊瘤型(YST)，原发性肝细胞癌型(PHC。

(1)良性肝脏疾病型，(2)卵黄囊瘤型(NR波>30%)，(3)原发性肝细胞癌型(NR波<15%)AFP异质体电泳图像的3种类型

20例患儿血清标本AFP值和NR%及与电泳图像的关系：表1中，前8例为胚芽细胞肿瘤，其中2例卵黄囊瘤、2例恶性畸胎瘤、2例胚胎癌呈明显的双波图像，其NR波与R波都接近或超过R波；而在2例新生儿良性畸胎瘤的电泳图像中，1例呈单一高大的R波，另1例仅有微小的NR波。表1中9～20例为其他疾病患儿：2例肝母细胞瘤及1例肝细胞癌的电泳图像中均呈高大的R波，而NR波较小。4例先天性胆道闭锁患儿的电泳图像中，仅有一高大的R波，无NR波出现。另5例其他病例标本均表现为单一的R波。

表1　胚芽细胞肿瘤及其他疾病的电泳波型与患儿AFP值和NR(%)的关系

病例号疾病年龄部位 AFP值(ng/ml) 电泳像 NR%

1 恶性畸胎瘤 4月骶尾部 980 双波 69.8

2 胚胎瘤 10月右睾丸 998 双波 54.9

3 卵黄囊瘤复发　9岁骶尾部 40 双波 46.4

4 恶性畸胎瘤 17月骶尾部 305 双波 39.3

5 胚胎瘤 18月左睾丸 85 双波 31.6

6 卵黄囊瘤 11岁左卵巢 1 147 双波 49.2

7 良性畸胎瘤 <0.5月骶尾部 1 881 双波 7.6

8 良性畸胎瘤 <0.5月骶尾部 718 单波

9 肝母细胞瘤　5月　 174 双波 5.4

10 肝母细胞瘤 <1月　 1 333 双波 9.7