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内切酶PCR反应中的活性

2019.7.29
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

酶切反应条件如下：在20 µl PCR产物混合体系中加入5U的内切酶，按相应的反应温度温育1小时。通常20 µl PCR产物体系中含有1 µg底物DNA，1单位的Vent DNA聚合酶，1× ThermoPol Buffer [10 mM KCl， 20 mM Tris-HCl （PH 8.8@25°C），10 mM (NH4)2SO4, 2 mM MgSO4和0.1% Triton X-100]，以及终浓度为200 µM的dNTPs。表中标记有*的内切酶在酶切反应前需加入NaCl（终浓度为100 mM）或相应的10× NEBuffer（1×终浓度）。

注意：在非最佳条件下进行酶切反应容易出现星号活性。要避免星号活性或希望取得更好的酶切效果，则需用乙醇沉淀纯化DNA，再将其溶解于相应的酶切缓冲液。此外，如果使用不纯的DNA聚合酶，会因其中混有其它核酸酶而影响整个反应结果。

+++表示完全切割；++表示约50%被完全切割；+表示约25%被完全切割。

酶

在反应物中的活性

Aat II + + + 
Acc I + 
Acc65 I + + 
Aci I + + + 
Acl I + + 
Afl II + + + 
Afl III + + 
Age I + + + 
Ahd I + + 
Alu I + + + 
Alw I + + 
AlwN I + + 
Apa I + ++ 
ApaL I + + + 
Apo I + + 
Asc I + + + 
Ase I + 
Ava I + + + 
Ava II + + 
Avr II + + + 
Bae Inone
BamH I 
+ + +
Ban I + + + 
Ban II + + + 
Bbs I + + + 
Bbv I + + 
Bcg I + + 
BciV I+ + 
Bcl I + + + 
Bfa I none
Bgl I + 
Bgl II + + + 
Blp I + + + 
Bmr I
+ + +
Bpm I + + 
Bsa I + 
BsaA I + + + 
BsaB I + + 
BsaH I + + + 
BsaJ I + + + 
BsaW I + + 
BseR I + + + 
Bsg I + + 
BsiE I + + 
BsiHKA I * + + 
BsiW I + + 
Bsl I+ + 
Bsm I + + + 
BsmB I + + 
BsmF I + + 
BsoB I + + + 
Bsp1286 I + + + 
BspD I + + 
BspE I * + + + 
BspH I + + 
BspM I none
Bsr I + + + 
BsrB I + + + 
BsrD I + + 
BsrF I + + 
BsrG I + + 
BssH II + + 
BssK I + + 
BssS I + + + 
BstB I + + + 
BstE I + + + 
BstN I + + 
BstU I + + 
BstX I + + + 
BstY I + + 
BstZ17 I + + 
Bsu36 I + + + 
Btg I
+ + +
Bts I
+ + +
Cac8 I + + + 
Cla I + + 
Dde I + + + 
Dpn I (none, requires methylated substrate) 
Dpn II + + + 
Dra I + + 
Dra III * + + + 
Drd I + + 
Eae I + + + 
Eag I + 
Ear I + + + 
EcoN I + + 
EcoO109 I + + + 
EcoR I + + 
EcoR V + + + 
Fnu4H I + + + 
Fok I none
Fse I + + + 
Fsp I + + 
Hae II + + + 
Hae III + + + 
Hga I + + + 
Hha I + + 
Hinc II + + 
Hind III + + + 
Hinf I + + 
HinP1 I + + + 
Hpa I + + + 
Hpa II + + + 
Hph I + + + 
Kas I + + + 
Kpn I + + + 
Mbo I + + 
Mbo II + + + 
Mfe I + + 
Mlu I + + 
Mly I
+ + +
Mnl I + + + 
Msc I + + 
Mse I + + 
Msl I + + + 
Msp I + + + 
MspA1 I + + + 
Mwo I + + 
Nae I + 
Nar I + + 
Nci I + + 
Nco I + + + 
Nde I + + 
NgoM IV + + 
Nhe I + + 
Nla III + + + 
Nla IV + + + 
Not I + + + 
Nru I + + 
Nsi I + + + 
Nsp I
+ + +
PaeR7 I + + 
PflF I + + 
PflM I + + 
Ple I + + 
Pme I + + 
Pml I + + 
PpuM I + + 
PshA I + + 
PspG I
+ +
Pst I + + + 
Pvu I + + 
Pvu II + + + 
Rsa I + + + 
Rsr II + + 
Sac I + + 
Sac II + + + 
Sal I * + 
Sap I + + 
Sau3A I + + + 
Sau96 I + + 
Sca I + + 
ScrF I + + + 
SexA I
none
SfaN I + + 
Sfc I + + + 
Sfi I + + + 
Sfo I
+ + +
SgrA I
+ + +
Sma I + + 
Sml I + + + 
SnaB I + + 
Spe I + + + 
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