乙醇脱氢酶的测定实验——氧化反应测定

乙醇脱氢酶稀释溶液

甘氨酸-二磷酸钠溶液磷酸钾乙醇NADBSA 溶液氨基脲

分光光度计

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.98 ml 实验混合物

0.02 ml ADH 稀释溶液

25℃ 时，于 340nm 处吸收值降低。NADH 的吸收系数 ε₃₄₀＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

试剂：

75 mmol/L 甘氨酸-二磷酸钠溶液 pH 9.0（10 g Na₄P₂O₇· 10 H₂O＋0.5 g 甘氨酸溶于 300 ml H₂O，用 1 mol/L HCl 调节至 pH 9.0）

0.1 mol/L 磷酸钾，pH 7.5

乙醇，p.A.（Mr＝46.1，d＝0.81 g/ml）

0.1 mol/L NAD（0.633 g 溶于 10 ml 0.1mol/L 磷酸钾，pH 7.5）

0.1mol/L 1，4-二硫代赤藻糖醇（DTE，Mr＝154.3，154 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾，pH 7.5）

0.1 g BSA 溶于 100 ml 0.1 mol/L磷酸钾，pH 7.5（BSA 溶液）

2.2 mol/L 氨基脲（Mr＝11.5，2.5 g 氨基脲-HCl 溶于 10 ml 2mol/LNaOH，用 5mol/L NaOH 调节 pH 到 6.3～6.5）

ADH，稀释同前